尊敬的审查员：

您好！申请人收到了国家知识产权局对申请号为201710322064.7发出的第一次审查意见通知书。申请人首先感谢审查员对完善本专利申请所作的辛勤劳动，申请人仔细阅读了审查意见通知书正文，申请人提出以下意见，希望和审查员商榷。

一、修改说明：

1.将权利要求2、5和6中的附加技术特征加入到权利要求1中，形成新的权利要求1。

2.删除权利要求2、5和6，并相应的修改其他权利要求的编号和引用关系，详见修改后的权利要求书。

以上修改均没有超出原说明书和权利要求书记载的范围，详见修改后的权利要求书。

二、关于修改后的权利要求1的创造性

修改后的权利要求与对比文件1的区别在于：1）所述用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞，具体为：于流式管中按照体积比1:1先后添加淋巴细胞分离液和抗凝血，保证抗凝血与淋巴细胞分离液分界清晰，离心分离后获得外周血白细胞；2）所述制备单细胞悬液具体为：将外周血白细胞用预冷的PBS液洗涤后重悬，调整为细胞浓度1×10⁶-1×10⁷个/mL的单细胞悬液，于 4℃保存备用。3）所述使用流式细胞仪进行检测，包括：在前向散射光/侧向散射光双参数图中调节电压和电流线性增益参数，使淋巴细胞与周围细胞分开；选取淋巴细胞并设门；用阴性设置管设定阴性区，用检测管调节荧光补偿。

基于上述区别技术特征，由图1-图3可知，本发明通过在分离外周血白细胞时尽量避免血液与淋巴细胞分离液互溶，以获取足量的淋巴细胞；在检测时，应正确圈取淋巴细胞群并合理调节电压及荧光补偿；从而成功建立了一种稳定规范的鸡外周血 T淋巴细胞亚群的流式细胞仪检测方法，避免了试验过程中人为因素造成的误差。应用流式细胞术更直观地展示鸡外周血T淋巴细胞亚群的分群，为鸡外周血T淋巴细胞亚群的研究提供了可靠的技术参考。

对比文件1(“重组鸡a干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性及体内最佳使用 剂量研究”，杨晓璐，中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑，第2期，第31-32页）公开了一种流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群百分含量的方法，没有公开用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞、单细胞悬液的制备方法以及使用流式细胞仪进行检测的过程，即本申请相对于对比文件1技术方案不同，本申请相对于对比文件1具有突出的实质性特点，根据本发明的背景技术可知，常规的流式细胞仪在样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定，这也是对比文件1所存在的技术困难，本申请克服了对比文件1所不能克服的技术困难，因此，本发明相对于对比文件1具有预料不到的技术效果。

对比文件2(“帕金森病患者外周血T淋巴细胞检测及临床意义”，余能伟等，四川医学，第33卷第8 期，第1465-1468页，2012年8月31日）公开了一种使用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的方法，本申请是针对鸡进行检测，而对比文件2是针对人进行检测，两者存在本质的区别，对比文件2也没有公开用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞，并且也没有公开具体的“调节电压和电流线性增益参数”这一技术方案，根据本发明的背景技术可知，常规的流式细胞仪在样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定，这也是对比文件2所存在的技术困难，本申请克服了对比文件2所不能克服的技术困难，因此，本发明相对于对比文件2具有预料不到的技术效果，另外，对比文件1和2均没有公开上述区别技术特征和技术效果，对比文件1和对比文件2无法结合对本申请构成技术启示。

另外，审查员认为：在通过调节电压和电流线性增益参数来对前向散射光/侧向散射光双参数图进行调整时，调节侧向散射光通道的电压，将淋巴细胞群与周围细胞分开；调节向前散射光通道的电流增益，使细胞团与细胞碎片分开，是本领域技术人员的常规操作手段；

申请人认为：根据本发明背景技术的记载：常规的流式细胞仪在样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定，本申请正好克服了这些技术困难，其次，在本申请提出的时候，申请人作为本领域的技术人员，并没有听说过上述应用。再次，若上述区別技术特征2为本领域的公知常识。那么应备很容易在教科书、技术手册和/或工具书中找到，但是由请人并未在在教科书、技术手册和/或工具书中找到相关记载，若审查员坚持认为上述区别技术特征为公知常识，敬请审查员举证。

因此，本申请相对于对比文件1、2以及公知常识具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有创造性。

三、关于修改后的权利要求2-7的创造性

在修改后的权利要求1具有创造性的前提下，其从属权利要求2-8也必然具有创造性。

综上所述，本申请文件公开的技术方案具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有创造性。如有问题，望及时联系申请人，给予再次答复的机会，联系电话：028-87763797。

请审查员继续审查。

致礼