尊敬的审查员：

您好！申请人收到了国家知识产权局对申请号为201710321388.9发出的第一次审查意见通知书。申请人首先感谢审查员对完善本专利申请所作的辛勤劳动，申请人仔细阅读了审查意见通知书正文，申请人提出以下意见，希望和审查员商榷。

一、修改说明：

1.将权利要求2、5和6中的附加技术特征加入到权利要求1中，形成新的权利要求1。

2.删除权利要求2、5和6，并相应的修改其他权利要求的编号和引用关系，详见修改后的权利要求书。

以上修改均没有超出原说明书和权利要求书记载的范围，详见修改后的权利要求书。

二、关于修改后的权利要求1的创造性

修改后的权利要求与对比文件1的区别在于：1）于2mL 规格的EDTA-Na₂抗凝管中加入2mL猪外周静脉血；2）所述使用流式细胞仪进行检测，包括：在前向散射光/侧向散射光双参数图中调节电压和电流线性增益参数，使左下方的淋巴细胞与邻近右上的单核细胞群分开；选取淋巴细胞并设门；用阴性设置管设定阴性区，用检测管调节荧光补偿。

基于上述区别技术特征，由图1-图5可知，本申请先对全血2mL 规格的EDTA-Na₂抗凝管进行盛放，用荧光单抗染色，再裂解红细胞，这是因为猪红细胞无核，通过裂解并洗除红细胞来可以获得较纯的白细胞。获得所需外周血白细胞，细胞碎片少。在检测时正确圈取淋巴细胞群并合理调节电压及荧光补偿，从而成功建立了一种稳定规范的猪外周血T淋巴细胞亚群的流式细胞仪检测方法，避免了试验过程中人为因素造成的误差。应用流式细胞术更直观地展示猪外周血T淋巴细胞亚群的分群，为猪外周血T淋巴细胞亚群的研究提供了可靠的技术参考。

对比文件1(“高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响”，张文利等，中国兽药杂志，第49卷第9期，第1-6页，2015年9月）公开了一种三色流式细胞术测定猪外周血T淋巴细胞亚群数量的方法，没有公开使用2mL 规格的EDTA-Na₂抗凝管以及使用常规的流式细胞仪进行检测，即本申请相对于对比文件1技术方案不同，本申请相对于对比文件1具有突出的实质性特点，根据本发明的背景技术可知，常规的流式细胞仪在样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定，这也是对比文件1所存在的技术困难，本申请克服了对比文件1所不能克服的技术困难，因此，本发明相对于对比文件1具有预料不到的技术效果。

对比文件2(“帕金森病患者外周血T淋巴细胞检测及临床意义”，余能伟等，四川医学，第33卷第8 期，第1465-1468页，2012年8月31日）公开了一种使用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的方法，本申请是针对猪进行检测，而对比文件2是针对人进行检测，两者存在本质的区别，对比文件2也没有公开使用2mL 规格的EDTA-Na₂抗凝管，并且也没有公开具体的“调节电压和电流线性增益参数”这一技术方案，根据本发明的背景技术可知，常规的流式细胞仪在样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定，这也是对比文件2所存在的技术困难，本申请克服了对比文件2所不能克服的技术困难，因此，本发明相对于对比文件2具有预料不到的技术效果，另外，对比文件1和2均没有公开上述区别技术特征和技术效果，对比文件1和对比文件2无法结合对本申请构成技术启示。

另外，审查员认为：在通过调节电压和电流线性增益参数来对前向散射光/侧向散射光双参数图进行调整时，调节侧向散射光通道的电压，将淋巴细胞群与周围细胞分开；调节向前散射光通道的电流增益，使细胞团与细胞碎片分开，是本领域技术人员的常规操作手段；

申请人认为：根据本发明背景技术的记载：常规的流式细胞仪在样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定，本申请正好克服了这些技术困难，其次，在本申请提出的时候，申请人作为本领域的技术人员，并没有听说过上述应用。再次，若上述区別技术特征2为本领域的公知常识。那么应备很容易在教科书、技术手册和/或工具书中找到，但是由请人并未在在教科书、技术手册和/或工具书中找到相关记载，若审查员坚持认为上述区别技术特征为公知常识，敬请审查员举证。

因此，本申请相对于对比文件1、2以及公知常识具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有创造性。

三、关于修改后的权利要求2-6的创造性

在修改后的权利要求1具有创造性的前提下，其从属权利要求2-6也必然具有创造性。

综上所述，本申请文件公开的技术方案具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有创造性。如有问题，望及时联系申请人，给予再次答复的机会，联系电话：028-87763797。

请审查员继续审查。

致礼