尊敬的审查员：

您好！申请人收到了国家知识产权局对申请号为201610978762.8发出的第三次审查意见通知书。申请人首先感谢审查员对完善本专利申请所作的辛勤劳动，申请人仔细阅读了审查意见通知书正文，申请人提出以下意见，希望和审查员商榷。

一、修改说明：

1、将原权利要求2中的附加技术特征加入到权利要求1中，形成新的权利要求1。

2、删除原权利要求2，并相应的修改其他权利要求的编号和引用关系。

以上修改均没有超出原说明书和权利要求书记载的范围，详见修改后的权利要求书。

二、关于修改后的权利要求1的创造性

修改后的权利要求1与对比文件1的区别在于：1）灰兜巴挥发性成分，剪碎碾磨步骤以及浓缩具体步骤，正己烷溶剂萃取结合恒温冷却摇床及其步骤；2）步骤3中浸提时间为30～40min。3）步骤4中旋转蒸发仪的温度为35～40℃。

基于上述区别技术特征，本发明通过GC-MS对两种灰兜巴样品的挥发油进行分析，并与标准数据库对照解析，确定出了灰兜巴挥发油中所含有的化学成分。并得出以下结论：1）灰兜巴挥发性成分的种类众多，高海拔灰兜巴样品共分离出了156个色谱峰，鉴定出了133种化学物质，占总挥发油含量的88.597%，低海拔样品共分离出了130个色谱峰，鉴定出103种化学物质，占总挥发油的87.296%。高海拔样品鉴定出的物质种类较低海拔样品多。高海拔灰兜巴样品中挥发油含量最高的化学成分是苯并环丁烯酮（6.711%），其次是E-15-十七碳烯醛（4.484%）、1-十六烯（3.745%）等；低海拔样品中含量最高的化学成分是十四烷（3.964%），其次是E-15-十七碳烯醛（3.961%）、2,4-二叔丁基苯酚（3.851%）等。2）对两种灰兜巴样品的挥发性成分进行对比，发现两种灰兜巴样品所含的挥发性成分种类以及含量都有很大差异，含量最高的都是烃类化合物，烃类化合物中脂肪烃含量都高于芳香烃含量。高低海拔两个样品脂肪烃含量分别为48.881%和45.394%；芳香烃含量分别为7.173%和7.553%。其次醇类化合物的含量较其他物质高。两种灰兜巴样品共含有40种相同的挥发性成分，例如：十二烷、十八烷、1-十九碳烯、邻苯二甲酸二异丁酯等物质。3）根据本次对灰兜巴挥发性成分的研究，发现有成分可与人胰岛素有关的蛋白质对接。

对比文件1(“植物挥发油提取方法及应用研究进展”，张志军等，《中国粮油学报》，第26卷第4期，2011年4月）公开了一种植物挥发油提取方法，采用超声波辅助提取挥发油，超声波的震动酶解是水，如果提取时间较长，会产生大量热能被水吸收，水温会升高，会破坏易挥发组分；在超声波的震动中，在提取的同时，也加速了成分的挥发，会影响提取效率。而且并不适合推广，因为超声波的声波污染非常大，要杜绝污染需要专门建设超声波房，投入较高，故该方法不环保，不利于劳动保护；没有公开上述区别技术特征，也没有确定出了灰兜巴挥发油中所含有的化学成分；更没有得到上述结论，因此，本发明相对于对比文件1具有意（预）料不到的技术效果。

此外，本发明采用的正己烷低毒高效，有利于劳动保护。本发明采用了低温提取浓缩工艺，避免对受热不稳定成分的影响。本发明采用摇床振荡提取，不会产生声波污染，且设备简单易得，利于降低成本和劳动保护。同时摇床振荡不会造成挥发性成分的大量挥发，可以提高提取效率。针对灰兜巴药材主要由绵软且韧性较强的菌丝组成，不变粉碎，延长粉碎时间又会产生热量，导致挥发性成分受热破坏，本发明采用液氮研末，增加药材脆性，且避免粉碎受热对成分的影响，粉碎效率高。

对比文件2 (“PPARs筛选模型的构建及抗糖尿病天然药物活性成分的筛选”，林叶新，《中国博士学位论文全文数据库工程科技I辑》2014年第02期，第 B016-20页，2014年2月15日）公开了一种灰兜巴中物质的提取方法，没有公开上述区别技术特征，虽然其采用正己烷作为提取溶剂，但是提取方法为加热回流提取法，和本发明有本质区别。温度的升高可能会导致灰兜巴挥发性成分的破坏和损失。且对比文件2的目的在于获得灰兜巴的不同极性部位测定其PPARγ或PPARβ激活能力，和本发明有本质区别。本申请采用低温对样品进行粉碎和正己烷提取，技术效果并不是审查意见中认为的“提高提取效率”，而是旨在最大程度保证灰兜巴挥发性成分不被破坏，从而得到了“高低海拔两个样品脂肪烃含量分别为48.881%和45.394%；芳香烃含量分别为7.173%和7.553%，以及本发明可与人胰岛素有关的蛋白质对接”的技术效果，因此，本发明相对于对比文件2具有预料不到的技术效果。

对比文件3 (“苍耳叶挥发油的提取及抑菌和抗氧化性研究”，肖家军等，《食品工业科技》第32卷第07 期，2011年12月31日）公开了一种苍耳叶挥发油的提取方法，本发明的技术效果并不是“提高提取效率”，而是“完全提取挥发性成分，并且避免温度过高对挥发性成分造成破坏”，以助于全面反应灰兜巴挥发性成分的组成和含量，由此得到“高低海拔两个样品脂肪烃含量分别为48.881%和45.394%；芳香烃含量分别为7.173%和7.553%，以及本发明可与人胰岛素有关的蛋白质对接”，对比文件3的技术效果是“提高提取效率”，因此，本发明相对于对比文件3具有预料不到的技术效果。

对比文件4 (“纯丝胶蚕 品种蚕蛹总脂肪酸含量测定及其脂肪酸成分的气相色谱-质谱联用分析”，李冰等，《中国蚕业》第34卷第04 期，2013年12月31日）公开了一种正己烷提取物质的方法，并具体公开了（第34页“1.2试验方法”)，没有公开上述区别技术特征，其样品前处理方法为“放在电热恒温鼓风干燥箱中用60℃左右的温度烘干，粉碎后过筛备用”，且采用正己烷为溶剂，摇床浸提的技术目的是对比脂肪酸组分相对含量。效果是“简化提取方法”，本发明样品采用液氮研抹成粉，正己烷低温摇床浸提，技术目的是避免温度对灰兜巴挥发性成分造成破坏，以寻找其活性物质基础。达到的技术效果是“高低海拔两个样品脂肪烃含量分别为48.881%和45.394%；芳香烃含量分别为7.173%和7.553%，以及本发明可与人胰岛素有关的蛋白质对接”，因此，本发明相对于对比文件4具有预料不到的技术效果。

对比文件1-4均没有公开上述区别技术特征和技术效果，4者相结合对本发明不构成技术启示。因此，本申请文件公开的技术方案具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有创造性。

综上所述，本申请文件公开的技术方案具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有创造性。如有问题，望及时联系申请人，给予再次答复的机会，联系电话：028-87763797。

请审查员继续审查。

致礼