本发明公开了一种PCR阳性对照品的制备方法,可以明显区分阳性对照品对核酸扩增体系的污染,提高PCR检测的准确性,降低假阳性。将PCR阳性片段的核酸序列从两个引物之间剔除一段序列,然后将其转化克隆工程菌,提取阳性质粒作为对照品,经改造的对照品不影响PCR引物的结合,也不影响PCR产物的扩增效率,而且由于片段长度小于正常阳性样本产物,所以在进行琼脂糖电泳的时候可以显著的区分开来,从而起到区别污染的作用。