本实用新型公开了一种厌氧无菌操作箱,其包括箱体、操作口和操作手套;操作面板上设有一抽气口,用于外接真空泵或吸尘器;箱体的上端设有真空表、进气阀门,以及磁力出气阀门;操作面板的四侧均通过扣手与箱体卡扣相接,且在操作面板上还环设有一圈密封条;操作手套为双层结构,且操作手套的内层与外层通过间隔分布的弹性连接带连接,弹性连接带上设置有通气孔;外层上位于指部处设置有加厚层,内层与外层的开口端连接处设置有充放气口,箱体内设置有用于杀菌的紫外灯和用于干燥的硅胶干燥剂盒。该厌氧无菌操作箱通过对其结构布局的有效设计,密封性能好,可满足厌氧菌接种、厌氧培养基制备等一系列厌氧操作,且操作便捷有效。