本发明属于兽用生物医药技术领域,具体涉及一种大口黑鲈虹彩病毒病灭活疫苗及其制备方法。该疫苗包括EPC细胞和蛙虹彩病毒LMBV。制备方法包括以下步骤:培养EPC细胞;将培养的EPC细胞进行LMBV病毒扩增,获得LMBV病毒液;将LMBV病毒液进行灭活处理。本发明制备的疫苗免疫保护效果好,可应用于大口黑鲈虹彩病毒病的预防免疫,提高养殖大口黑鲈的存活率和养殖效益。