尊敬的国家知识产权局:

申请人收到了国家知识产权局对申请号为201710486964.5发出的第二次审查意见通知书。申请人首先感谢审查员对完善本专利申请所作的辛勤劳动,申请人仔细阅读了审查意见通知书正文,按通知书的要求进行了修改,请人提出以下意见,希望和审查员商榷:

一、修改说明:

1、将权利要求2中的附加技术特征加入权利要求1中,形成新的权利要求1

以上修改没有超出原权利要求书和说明书的范围。详见修改后的权利要求书。

二、关于修改后权利要求1的创造性

修改后权利要求1与对比文件1的区别在于:16℃,30min1μL混合液加入10μL DH5α冰上30min,做一个重复组;42℃热激90s,冰上3min500μLLB培养基,37℃,复苏45-60min220RPM/min4000RPM/min离心,2min,弃400μL,重悬,LA平板上涂板,37℃过夜培养,不超过16h

基于上述区别技术特征,本发明权利要求1 为肉鸡,对比文件1SPF鸡;本申请的构建肉鸡肠道微生物质粒的条件为:16℃,30min1μL混合液加入10μL DH5α冰上30min,做一个重复组;42℃热激90s,冰上3min500μLLB培养基,37℃,复苏45-60min220RPM/min4000RPM/min离心,2min,弃400μL,重悬,LA平板上涂板,37℃过夜培养,不超过16h可见,两者作用的对象不同,构建肉鸡肠道微生物质粒的条件也不相同,因此,本申请相对于对比文件1具有突出的实质性特点,本发明通过利用肠道菌群的特异性保守基因片段插入载体构建质粒的方法,提高了菌种检测的准确性,解决了标准菌株做标准曲线的局限性;本发明通过对肉鸡肠道微生物的绝对定量,可以确定某种菌的绝对拷贝数,对肠道菌群多样性和丰度的分析提供了参考依据。由实施例1-3可知,扩增效率能够达到94.7%;对比文件1并没有给出具体的扩增效率,因此无法得出其能够达到本申请的技术效果,因此,本申请相对于对比文件1具有预料不到的技术效果。

对比文件2(Comparison of agar plate and realtime PCR on enumeration of Lactobacillus, Clostridium perfringens and total anaerobic bacteria in dog faeces”,Fu CJ 等,LETTERS IN APPLIED MICROBIOLOGY, 42卷第5期,第490-494页,公开日期:20060329日)公开了(参见摘要,第491页表1)从样品中总基因组DNA被提取的QIAamp®DNA粪便微型试剂盒,没有公开上述区别技术特征和技术效果,因此,本发明相对于对比文件2具有预料不到的技术效果。

另外,审查意见里指出:本领域技术人员知晓(“动物病原菌检测技术指南”,王真等,北京:中国农业大学 出版社,第181 -182页,公开日期:20160731日,参见第182页第1段),反应的扩增效率为90%-105%,如果扩增效率小于90%或大于105%,一般会建议重新设计引物或探针再次试验。

申请人认为:这一观点与本申请并不相关,该公知常识仅仅是给出一个扩增效率的范围,这一范围仅仅是一个公知常识,它与本申请的扩增效率毛病没有关系,例如:一个物质成分的提取率为0-100%,但是,针对一个特定的物质成分而言,他的提取率跟这个范围的大小并没有关系。

审查意见里指出:实施例2中用于总菌的引物扩增效率为94. 7%,其使用的上游引物:CGGCAACGACGCAACCC和下游引物: CCATTGTAGCACGTGTGTAGCC,已被参考文件1 (“合生素对肉仔鸡肠道微生物区系的影响”,杨会玲等,中国农 业科学,第44卷第23期,第4882-4891页,公开日期:20111231日)公开(参见第4885页表3 菌微生物),并用于实时荧光定量PCR法检测肉仔鸡肠道微生物总菌数量;

申请人认为:本申请的构建肉鸡肠道微生物质粒的条件与该公知常识不同,其效果也不相同。

由于对比文件12均没有公开上述区别技术特征和技术效果,因此两者相结合对本申请不构成技术启示,上述区别技术特征也不是本申请的公知常识,因此,本申请相对于对比文件12和公知常识具有突出的实质性特点和显著的进步,因而具有创造性。

三、关于修改后权利要求2-6的创造性

在修改后的权利要求1具有创造性的前提下,其从属权利要求2-6也必然具有创造性

综上所述,本申请文件公开的技术方案具有突出的实质性特点和显著的进步,因而具有创造性。如有问题,望及时联系申请人或代理人,给予再次答复的机会,联系电话:13551134124

请审查员继续审查。

致礼