本发明公开了一种蛋鸡卵巢氧化应激模型的建立方法,包括以下步骤:选用产蛋高峰期的罗曼粉蛋鸡,采用单因素试验设计,设6个处理,分别为1个对照组和5个叔丁基过氧化氢组,对照组饲喂生理盐水;最后一次饲喂后48h进行采样;试验期为24天,饲粮为玉米-豆粕型基础饲粮,饲养管理按常规饲养管理进行;记录产蛋率,通过ELISA方法测定雌二醇等的浓度;最后一次饲喂生理盐水和叔丁基过氧化氢后48h收集卵巢,HE染色后,对原始卵泡数量进行统计,并对前等级和等级卵泡计数和量取;利用HPLC和试剂盒方法测定卵巢中维生素C等的含量或活性。本发明的方法能够增加卵巢自由基的含量,降低卵巢抗氧化酶活,导致了蛋鸡氧化应激。