1. 一种用于检测燕麦属植物染色体的探针组,其特征在于,包括Aml、(ACT)6、(GAA)6、(TTG)6四种探针,其中所述Aml探针由51个碱基对组成,其碱基序列为:5′- GATCCATGTGTGGTTTGTGGAAAGAACACACATGCAATGACTCTAGTGGTT -3′,用于特异性识别燕麦属C基因组所有染色体;所述(ACT)6探针的碱基序列为:5′- ACTACTACTACTACTACT -3′,用于识别偏好C基因组部分染色体的部分结构,也微弱识别A染色体组部分染色体的部分结构;所述(GAA)6探针的碱基序列为:5′- GAAGAAGAAGAAGAAGAA -3′,用于识别偏好A和C基因组部分染色体的部分结构;所述(TTG)6探针的碱基序列为:5′- TTGTTGTTGTTGTTGTTG -3′,用于识别偏好A基因组部分染色体部分结构,微弱识别C基因组部分染色体的部分结构。
2. 根据权利要求1所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的探针组,其特征在于,所述Aml探针采用FAM或者TAMRA标记其序列的5’端。
3. 根据权利要求1所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的探针组,其特征在于,所述(ACT)6探针采用FAM或者TAMRA标记其序列的5’端。
4. 根据权利要求1所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的探针组,其特征在于,所述(GAA)6探针采用FAM或者TAMRA标记其序列的5’端。
5. 根据权利要求1所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的探针组,其特征在于,所述(TTG)6探针采用FAM或者TAMRA标记其序列的5’端。
6. 一种用于检测燕麦属植物染色体的试剂盒,其特征在于,包括:
(1)权利要求1~5任意一项所述的探针组;
(2)酶解液;
(3)4%多聚甲醛液;
(4)2×SSC缓冲液;
(5)70%FA液;
(6)杂交液;
所述杂交液由等体积的1×TE和2×SSC缓冲液组成;其中1×TE的配制方法为:每800mL的ddH2O中加入1.211g Tris和0.372g EDTANa2•2H2O,用HCl调pH到8.0,定容到1000mL,灭菌后即得。
7. 根据权利要求6所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的试剂盒,其特征在于,所述酶解液的配制方法为:每1mL的柠檬酸缓冲液中加入0.04g纤维素酶和0.02g果胶酶;其中柠檬酸缓冲液的配制方法为:每50mL的ddH2O加0.5707g柠檬酸三钠和0.4324g柠檬酸。
8. 根据权利要求6所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的试剂盒,其特征在于,所述2×SSC缓冲液的配制方法为:每1000mL的ddH2O加入8.823g柠檬酸三钠和17.532g氯化钠。
9. 根据权利要求6所述的一种用于检测燕麦属植物染色体的试剂盒,其特征在于,所述70%FA液由去离子甲酰胺(FA)和2×SSC缓冲液按照体积比7:3组成。
10. 一种用于检测燕麦属植物染色体的方法,是采用权利要求6~9任意一项权利要求所述的试剂盒,其特征在于,包括以下步骤:
1)燕麦属植物染色体载玻片标本的制备:将燕麦属植物种子用双蒸水浸泡,置于4℃环境中放置24h,吸去多余水分,并于22℃恒温培养,待根尖长至1.5~2.0cm时,剪取1~1.5cm根尖组织,依次用N2O处理5h、冰醋酸处理5min,然后置于75%酒精中于-20℃保存;
将低温保存的根尖组织以双蒸水清洗后切取根尖分生组织1~2mm,置于酶解液中于37℃酶解45min,去除酶解液,依次用双蒸水、75%酒精、95%酒精、100%酒精清洗根尖分生组织后室温晾干;在根尖组织中加入冰醋酸制成悬浮液;将悬浮液滴于载玻片上室温晾干后镜检,镜检良好的玻片于-20℃保存;
2)荧光原位杂交:将载玻片置于4%多聚甲醛中处理10min,然后用2×SSC缓冲液处理两次,每次5min,再依次用75%酒精、95%酒精、100%酒精梯度处理,每次5min,室温晾干后滴加70%FA液,盖上盖玻片,于80℃变性2min;
载玻片变性完成后于5s内依次放入-20℃的75%酒精、95%酒精、100%酒精梯度处理,每次5min,室温晾干;在晾干的载玻片上滴加放有探针的杂交液,每张载玻片滴加10μL放有探针的杂交液,其中每种探针含有0.5μL,剩余为杂交液;盖上盖玻片,于黑暗条件下在杂交盒中于37℃恒温孵化1.5~2h;
将孵化完成的载玻片在避光条件下依次用2×SSC缓冲液清洗3min、双蒸水清洗2min,室温晾干;
3)信号检测:晾干后的载玻片上加入DAPI,盖上盖玻片,采用荧光显微镜对载玻片进行检测,采集检测图像;
4)载玻片回收:信号采集之后回收制片并放入2×SSC缓冲液中于60℃水浴5min,依次在75%酒精、95%酒精、100%酒精中梯度处理,每次5min,处理完成后将回收制片于日光灯下放置12h;-20℃保存以备下次使用。