1. 一种非诊断目的的检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法,其特征在于,包括以下步骤:
以待检测样品的RNA为模板,反转录得到cDNA,用检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的引物,对待测样本进行RT-PCR扩增,用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物;扩增产物大小为887 bp,则样本中含有或候选含有猪蓝耳病毒经典毒株;扩增产物大小为797 bp,则样本中含有或候选含有高致病性变异毒株;扩增产物大小为493 bp,则样本中含有或候选含有NADC-30毒株;
所述引物包括上游引物和下游引物,所述上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示;
所述RT-PCR扩增的反应体系如下:模板cDNA 3 µL,Quick Taq HS DyeMix 10 µL,上游引物和下游引物各 0.6 µL,余下的由ddH2O 补足,总量为20 µL;
所述RT-PCR扩增的反应体系条件如下:94℃预变性2 min;94℃变性 30 s,55℃退火30 s,68℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸8 min;
用购自宝生物工程(大连)有限公司的反转录试剂盒进行反转录,所述反转录的步骤为:将RNA模板4 µL与1号5×Prime Script Buffer 4 µL、2号Prime
ScriptRT Enzyme Mix 1μL、4号Random 6 mers 2 µL和5号RNase Free dH2O 9 μL混匀,放入PCR仪上进行反转录。
2. 根据权利要求1所述的检测猪蓝耳病毒经典毒株、高致病性变异毒株和NADC-30毒株的RT-PCR方法,其特征在于,所述反转录的反应条件为:37℃ 15 min,85℃ 15 s,16℃ 10 min。