1. 一种基于酶切的TA克隆载体，其特征在于，所述基于酶切的TA克隆载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，命名为pTA03载体；

其构建方法包括以下步骤：取3-5μg pTA03载体，37℃条件下用限制性内切酶AhdI酶切消化3-18小时，酶切结束后补加少量EcoRV-HF内切酶消化30分钟，65℃保持20分钟，酶切产物采用酶切试剂盒直接过柱回收，或者用DNA凝胶回收试剂盒回收；回收产物-20℃保存，该产物即为制备好的TA克隆载体。

2. 一种如权利要求1所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、制备基于酶切的TA克隆载体：取3-5μg pTA03载体，37℃条件下用限制性内切酶AhdI酶切消化3-18小时，酶切结束后补加少量EcoRV-HF内切酶消化30分钟，65℃保持20分钟，酶切产物采用酶切试剂盒直接过柱回收，或者用DNA凝胶回收试剂盒回收；回收产物-20℃保存，该产物即为制备好的TA克隆载体；

步骤2、将步骤1制备好的基于酶切的TA克隆载体与目的PCR片段混合配制连接反应体系，混匀后短暂离心3-5秒，将混合液于22度反应5分钟，反应结束后置冰上，进行后续的转化反应。

3. 根据权利要求2所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，步骤1中的酶切反应体系具体为：10xCutSmart Buffer（NEB） 10µL，10U/µL的限制性内切酶AhdI 2µL，1µg/µl的基于酶切的TA克隆载体 5µL，余量为H₂O，以上体积总量为100µL。

4. 根据权利要求2所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，步骤2中的连接反应体系具体为：10xT4 DNA ligase Buffer（NEB） 1µL，400U/µL的T4 DNA ligase 0.5µL，50ng/µL的TA克隆载体 1µL，目的PCR片段与TA克隆载体的摩尔比为3～7：1，余量为ddH₂O，以上体积总量为100µL。

5. 根据权利要求4所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，连接体系中的基于酶切的TA克隆载体的添加量为0.03pmol，当目的PCR片段的长度在2000bp以下时，目的PCR片段： TA克隆载体的摩尔比为7：1，22℃连接5分钟；当目的PCR片段的长度在2000bp以上时，目的PCR片段： TA克隆载体的摩尔比为3：1，22℃连接30分钟。

6. 根据权利要求4所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，目的PCR片段的用量(µl)=[660 × A ×0.03×B(ng)]÷[1000×目的PCR片段浓度（ng/µl）]，其中A是目的PCR片段的碱基对数（bp），B是PCR片段：TA克隆载体的摩尔比。