1. 流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,获取受试鸡胸腺组织并制取单细胞悬液,所述制取单细胞悬液具体为:将获取的胸腺组织用机械破碎法获得单细胞,过滤、洗涤,所述洗涤具体是以600-1000r/min的转速离心5分钟,后用预冷的PBS液稀释细胞,获得浓度为1×106-1×107个/mL单细胞悬液,于 4℃保存备用;
步骤2,取所述单细胞悬液两份,一份加入抗鸡的CD3、CD4和CD8单克隆抗体各一头份,旋涡混匀,于4℃避光染色,所述染色的时间为30min,用于检测;另一份用于设置阴性区;
步骤3,取染色后的细胞液,用PBS洗涤并重悬细胞,使用流式细胞仪进行检测,所述使用流式细胞仪进行检测,包括:在前向散射光/侧向散射光双参数图中调节电压和电流线性增益参数,使组织细胞团位于散点图的中央区;选取胸腺细胞并设门;用阴性设置管设定阴性区;用检测管调节通道的荧光补偿,完成样品的数据获取;
所述调节电压和电流线性增益参数,具体为:调节侧向散射光通道的电压,使细胞位于侧向散射光轴的中段;调节前向散射光通道的电流线性增益参数,使组织细胞与细胞碎片分开;
所述调节通道的荧光补偿,具体为:在CD4和CD8的双参数图中,调节CD4+CD8+细胞的比例大于60%,且与CD8单阳性细胞间具有分界;
步骤4,分析检测结果,获得鸡胸腺T淋巴细胞亚群比例;分析检测结果,包括:圈取目标细胞并设门、分别在CD3/CD4、CD3/CD8、CD4/CD8象限图中准确界定双阴性区、单阴性区和双阳性区,分别读取CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+ 、CD4+CD8-、CD4-CD8+和CD4+CD8+T淋巴细胞百分比,从而获得鸡胸腺T淋巴细胞亚群比例;所述圈取目标细胞并设门要求圈取除碎片以外98%以上的胸腺组织细胞。
2. 如权利要求1所述的流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法,其特征在于,所述设定阴性区具体为:用阴性设置管上流式细胞仪,设定散点图中十字门左下方的区域为阴性区,调节电压使阴性区内细胞百分比大于98%。