本发明提供一种牛纽布病毒VP1基因、重组蛋白及其应用。所述VP1基因具有SEQ ID NO1所示的核苷酸序列。所述重组VP1基因蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO2所示。用以上氨基酸序列构建的原核表达系统可以短期内获得大量优良的重组蛋白,同时缩短了重组蛋白的表达时间、提高了重组蛋白的生产效率。用所表达的重组蛋白包被抗原,成功的建立了一种牛纽布病毒抗体的间接ELISA检测方法,并确定该方法的最佳条件,为免疫牛群抗体检测和进行流行病学调查提供了一种快速简便的血清学方法。