1. 一种基于恒温隔绝式荧光PCR平台的牛传染性鼻气管炎病毒检测试剂盒,其特征在于,包括反应缓冲液、荧光定量PCR反应液冻干管、阳性对照品冻干管和阴性对照品冻干管;
所述荧光定量PCR反应液冻干管包括Taq酶1.25μL、权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒上游引物、牛传染性鼻气管炎病毒下游引物各4μL和牛传染性鼻气管炎病毒探针0.35μL、dNTPs 4.25μL;
所述Taq酶的终浓度为5U·μL-1,牛传染性鼻气管炎病毒上游引物和牛传染性鼻气管炎病毒下游引物的终浓度均为10 μmol·μL-1,牛传染性鼻气管炎病毒探针的终浓度为10 μmol·μL-1,dNTPs的终浓度为2.5 mM;
所述荧光定量PCR反应液冻干管通过以下方法制备得到:将上述的Taq酶、牛传染性鼻气管炎病毒上游引物、牛传染性鼻气管炎病毒下游引物和牛传染性鼻气管炎病毒探针、dNTPs混合加入0.5ml的PCR管中降至-50℃,然后在10pa气压下冻干24h,形成干粉状后闭管,制得荧光定量PCR反应液冻干管;
所述牛传染性鼻气管炎病毒上游引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 所示;所述牛传染性鼻气管炎病毒下游引物的核苷酸序列如 SEQ ID
NO.2 所示;所述牛传染性鼻气管炎病毒探针的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3 所示;牛传染性鼻气管炎病毒探针的核苷酸序列的 5'端连接有 6-FAM 标记,3 '端连接有非荧光淬灭基团和BHQ1;
阳性对照品冻干管通过以下方法制备得到:将含有牛传染性鼻气管炎病毒DNA片段的DNA样品100μL装入PCR管内,降至-50℃,然后在10pa气压下冻干24h,形成干粉状后闭管制备而成;阴性对照品冻干管通过以下方法制备得到:将无牛传染性鼻气管炎病毒DNA片段的样品100μL装入PCR管内,降至-50℃,然后在10pa气压下冻干24h,形成干粉状后闭管制备而成。
2、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光 PCR 平台的牛传染性鼻气管炎病毒检测试剂盒,其特征在于,所述荧光定量PCR反应液冻干管设置有48管。
3、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光 PCR 平台的牛传染性鼻气管炎病毒检测试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液由以下组分构成:500 mM KCl,pH 8.3、100 mM Tris-HCl,15 mM MgCl2,余量为ddH2O,以上体积总量为3ml。
4、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光 PCR 平台的牛传染性鼻气管炎病毒检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒保存于4℃下。