1. 一种羊口疮病毒抗体间接ELISA检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒以ORFV-B2Ls表达蛋白为包被抗原;

所述ORFV-B2Ls表达蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示;

所述ORFV-B2Ls表达蛋白通过以下方法制备得到:选取B2L基因的第166-351核苷酸的序列,运用密码子偏好性分析工具VisualGeneDeveloper软件进行基因序列优化,运用E. coli Codon Usage Analyzer 2.1在线软件分析B2Ls在大肠杆菌表达系统中的密码子适应指数,将优化好的B2L基因命名为B2Ls,将该序列合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),酶切位点分别为BamHIHindⅢ,转化至宿主菌E.coli BL21DE 3)中,于氨苄青霉素抗性的平板上选择单个疑似阳性菌落接种LB液体培养基,提取质粒经双酶切鉴定并测序正确的保菌;将重组菌接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中,摇菌;离心收集菌体,破碎处理,收集上清,按GE Ni Sepharose 6 Fast Flow 说明书纯化上清蛋白,得到ORFV-B2Ls表达蛋白;

所述试剂盒中包被抗原的包被浓度为4ng/ml

2、根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括封闭液,所述封闭液为5%脱脂奶乳。

3、根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括酶标二抗,所述酶标二抗为HRP标记的二抗,酶标二抗的稀释度为1:4000

4、一种羊口疮病毒抗体间接ELISA检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)抗原包被:用包被液稀释权利要求1所述的ORFV-B2Ls表达蛋白至适当浓度,100μl每孔,室温包被2h;加PBST洗涤液洗涤3次,200μl每孔;

2)封闭:每孔加入封闭液200μl4℃过夜封闭,弃去液体,同上洗涤;

3)加入一抗:将一抗使用PBST稀释,配制成抗体稀溶液作为待检血清稀释液,使用待检血清稀释液稀释样品,加入酶标板中,100μl每孔,室温孵育2h,弃去液体,同上洗涤;

4)加HRP标记的二抗:将HRP标记的二抗稀释至1:4000100μl每孔,室温孵育45min,弃去液体,同上洗涤;

5)显色:每孔加100μlTMB显色液,室温避光反应20min

6)终止反应:每孔加入50μl M H2SO4终止液。

7)读数:于ELISA酶标仪读取OD450nm吸光度数值。

5、权利要求1-3任一所述的试剂盒在检测羊口疮病毒抗体中的应用。