尊敬的国家知识产权局:
申请人收到了国家知识产权局对申请号为201810805441.7发出的第二次审查意见通知书。申请人首先感谢审查员对完善本专利申请所作的辛勤劳动,申请人仔细阅读了审查意见通知书正文,按通知书的要求进行了修改,申请人提出以下意见,希望和审查员商榷:
一、修改说明:
1、将权利要求2中的附加技术特征加入到权利要求1中,形成新的权利要求1。
2、删除权利要求2,并相应的修改其他权利要求的编号和引用关系。
以上修改没有超出原权利要求书和说明书的范围。详见修改后的权利要求书。
二、关于修改后的权利要求1的创造性
修改后的权利要求1与对比文件1的区别在于:本发明中羊口疮B2L蛋白与已经公开发表的B2L不同;所述试剂盒中包被抗原的包被浓度为4ng/ml。
基于上述区别技术特征,本发明中羊口疮B2L蛋白与已经公开发表的B2L不同;本发明的蛋白是B2L基因经过密码子优化的蛋白,其在表达系统中的表达量更高、活性更好,由表5可知,在1:20000倍稀释的阳性血清获得OD值为0.874;在实际生产应用中可能起到更易获得、降低生产成本的作用;本发明的B2L基因的优化需要克服技术障碍;根据原核表达系统密码子偏好性对截短B2L蛋白进行了密码子优化筛选,提高外源活性蛋白的表达;表达并纯化了可溶性的B2L蛋白表达,使其具有良好的生物学活性。
对比文件1(何建斌,羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立,《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》,第01期,D050-505,2018年1月15日)为最接近的现有技术,对比文件1公开的B2L蛋白的原核表达已经是成熟的技术,目前还没有提高原核表达的表达量及其活性的现有技术,因此,本申请相对于对比文件1具有突出的实质性特点。且本申请的灵敏度高于对比文件1,因此,本申请相对于对比文件1具有预料不到的技术效果。
对比文件2 (CN106432433A) 中公开了分析羊口疮病毒B2L抗原的详细结构特征,发现第58-112位氨基酸易形成B细胞表位,并对预测表位区段重组蛋白进行表达、纯化、检测(参见说明书第42-94段)。其公开的截短表达了B2L蛋白,使其易于表达及纯化而不失其免疫原性,因此,本申请相对于对比文件2具有突出的实质性特点。且本申请的灵敏度高于对比文件2,因此,本申请相对于对比文件2具有预料不到的技术效果。
审查意见里指出:密码子优化是本领域的公知常识(参见王晓佳编著,《蛋白质技术在病毒学研究中的应用》,北京:中国科学技术出版社,2015年8月),以大肠杆菌为宿主菌的密码子优化技术也已经是本领域非常成熟的技术,本领域技术人员熟知大肠杆菌的密码子偏好,普遍存在动机去利用多种设计软件对基因序列进行优化,以获得高效的蛋白表达,本申请说明书中也并没有实验数据证明优化后的序列在表达中例如在蛋白表达量或
活性的提高等方面取得了预料不到的技术效果。
申请人认为:本发明作为一个整体的技术方案,已经给出了“本发明的蛋白是B2L基因经过密码子优化的蛋白,其在表达系统中的表达量更高、活性更好,由表5可知,在1:20000倍稀释的阳性血清获得OD值为0.874;在实际生产应用中可能起到更易获得、降低生产成本的作用”这一有实验数据做支撑的技术效果,因此,本申请说明书中给出了实验数据证明优化后的序列在表达中例如在蛋白表达量或活性的提高等方面取得了预料不到的技术效果。
审查意见里指出:至于B2L蛋白的截短表达,对比文件2中已经公开了重组表 达羊口疮病毒B2L蛋白片段即截短表达B2L蛋白作为抗原,并公开了第58-112位氨基酸易形成B细胞表位,因此在对比文件2的启示下,本领域技术人员可以截取B2L蛋白第58-112位氨基酸片段或与其相近的序列片段,用于对比文件1中作为包被抗原。而对于申请人所说的“本发明的重点在于改变了 B2L基因中的碱基”,如前所述,改变B2L基因中碱基这一过程,即密码子优化的过程,并不需要付出创造性劳动,经优化的序列是本领域技术人员可以在有限的试验中通过常规的实验手段而得到的。
申请人认为:该发明与其他公开发表的文章一样,选择了B2L蛋白作为包被抗原,其抗原表位等一系列分析研究已经成熟,然而该发明中B2L基因经过了密码子优化,其蛋白中组成氨基酸的碱基已经发生了改变,既B2L基因发生了改变,但翻译的B2L蛋白没有变化。故本发明的重点在于改变了B2L基因中的碱基,而非B2L蛋白序列;因此,对比文件1和2相结合并不能对本申请构成技术启示。
因此,修改后的权利要求1相对于对比文件1和公知常识具有突出的实质性特点和显著的进步,因而具有创造性。
三、关于修改后权利要求2-3的创造性
在修改后的权利要求1具有创造性的前提下,其从属权利要求2-3也必然具有创造性。
四、关于修改后权利要求4和5的创造性
修改后权利要求4和5与修改后的权利要求1具有单一性,在修改后的权利要求1具有创造性的前提下,修改后权利要求4和5也必然具有创造性。
综上所述,本申请文件公开的技术方案具有突出的实质性特点和显著的进步,因而具有创造性。如有问题,望及时联系申请人或代理人,给予再次答复的机会,联系电话:13551134124。
请审查员继续审查。
致礼
申请人:内蒙古农业大学
2021年04月9日