1. 一种基于恒温隔绝式荧光PCR平台的牦牛冠状病毒检测试剂盒,其特征在于,包括反应缓冲液、荧光定量PCR反应液冻干管、阳性对照品冻干管和阴性对照品冻干管;所述荧光定量PCR反应液冻干管包括Taq1.25μL、反转录酶1.5μL、牦牛冠状病毒上游引物、牦牛冠状病毒下游引物各3.0μL和牦牛冠状病毒探针0.3μLdNTPs 3μL

所述Taq酶的终浓度为5U·μL-1,反转录酶的终浓度为20U·μL-1,牦牛冠状病毒上游引物和牦牛冠状病毒下游引物的终浓度均为10 μmol·μL-1,牦牛冠状病毒探针的终浓度为10 μmol·μL-1dNTPs的终浓度为2.5 mM

所述荧光定量PCR反应液冻干管通过以下方法制备得到:将所述的Taq酶、反转录酶、牦牛冠状病毒上游引物、牦牛冠状病毒下游引物和牦牛冠状病毒探针、dNTPs混合加入0.5mlPCR管中降至-50℃,然后在10pa气压下冻干24h,形成干粉状后闭管,制得荧光定量PCR反应液冻干管;

所述牦牛冠状病毒上游引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 所示;所述牦牛冠状病毒下游引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2 所示;所述牦牛冠状病毒探针的核苷酸序列如 SEQ ID NO.3 所示;牦牛冠状病毒探针的核苷酸序列的 5'端连接有 FAM 标记,3 '端连接有非荧光淬灭基团和BHQ

2、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光 PCR 平台的牦牛冠状病毒检测试剂盒,其特征在于,所述荧光定量PCR反应液冻干管设置有50管。

3、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光PCR平台的牦牛冠状病毒检测试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液由以下组分构成:500 mM KClpH 8.3100 mM Tris-HCl15 mM MgCl2,余量为ddH2O,以上体积总量为3ml

4、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光PCR平台的牦牛冠状病毒检测试剂盒,其特征在于,阳性对照品冻干管通过以下方法制备得到:将含有牦牛冠状病毒RNA片段的RNA样品100μL装入PCR管内,降至-50℃,然后在10pa气压下冻干24h,形成干粉状后闭管制备而成;

阴性对照品冻干管通过以下方法制备得到:将无牦牛冠状病毒RNA片段的样品100μL装入PCR管内,降至-50℃,然后在10pa气压下冻干24h,形成干粉状后闭管制备而成。

5、根据权利要求1所述的基于恒温隔绝式荧光PCR平台的牦牛冠状病毒检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒保存于4℃下。