1. 一种非诊断目的地检测牛冠状病毒的间接ELISA方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）包被抗原：将重组VPN蛋白作为抗原使用50mM pH 7.6 的磷酸盐缓冲液稀释后包被于酶标板中，100 µL/孔，4℃过夜；抗原的包被浓度为0.2-3.5μg/ml；所述牛冠状病毒重组VPN蛋白含有SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列，其制备方法包括：采用原核表达载体pET-28H-VPN转化大肠杆菌Rosetta(DE3)；培养转化体，诱导重组VPN蛋白表达，回收并纯化所表达的重组VPN蛋白；

（2）洗涤酶标板：次日弃去包被液，用PBST洗涤3次，200 µL/孔；

（3）封闭：加入2% 牛血清白蛋白作为封闭液，100 µL/孔，37℃ 1h；

（4）洗涤酶标板：弃去包被液，洗涤3次；

（5）孵育一抗：将阴性和阳性血清用1% 牛血清白蛋白分别按比例稀释后加入酶标板中，100 µL/孔，37℃ 2h；

（6）洗涤酶标板：弃去板中的液体，洗涤4次；

（7）酶标二抗：加入用1% 牛血清白蛋白按一定稀释的HRP标记的羊抗牛IgG，100 µL/孔，37℃ 1h；HRP标记的羊抗牛IgG的稀释度为1:2500；

（8）洗涤酶标板：弃去板中的液体，洗涤5次；

（9）显色：加入TMB显色液，100 µL/孔，37℃避光显色30 min；

（10）终止：加入 2mol/L H₂SO₄终止反应，100 µL/孔；

（11）读数：在酶标仪上读取D_450nm值；试验设标准阳性、标准阴性血清对照。

2、根据权利要求1所述的间接ELISA方法，其特征在于，所述的标准阳性血清为牛冠状病毒阳性血清；所述的标准阴性血清为胎牛标准阴性血清；所述的酶标抗体结合物为辣根过氧化物酶标记的羊抗牛IgG；所述的底物显色液为四甲基联苯胺。

3、根据权利要求1所述的间接ELISA方法，其特征在于，所述的抗原的包被浓度为0.2188μg/ml，血清的稀释度为1:200。