1. 一种检测猪非典型瘟病毒的荧光定量RT-PCR引物和探针,其特征在于,包括上游引物APPV F、下游引物APPV R以及探针APPV Probe,其中,上游引物APPV F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物APPV R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示,探针APPV Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2、一种非诊断目的地检测猪非典型瘟病毒的荧光定量RT-PCR的方法,其特征在于,包括以下步骤:
提取待检测样品的RNA,以待检测样品的RNA为模板,反转录得到cDNA,用权利要求 1中所述的引物和探针对cDNA进行荧光定量RT-PCR扩增;通过实时荧光定量PCR仪进行结果的读取,判断S型扩增曲线和CT值,在扩增曲线正常的情况下,若CT值>0时,则可记为阳性,若CT值= 0时,则记为阴性。
3、根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述反转录的步骤为:将RNA模板4 µL、1号5×Prime Script Buffer 4 µL、2号Prime ScriptRT Enzyme Mix 1 μL、4号Random 6 mers 2 µL和5号RNase Free dH2O 9 μL混匀,放入PCR仪上进行反转录。
4、根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述荧光定量RT-PCR的反应检测体系为:Premix Ex Taq10 μL,上游引物APPV F、下游引物APPV R各0.5 μL,探针APPV Probe 0.8 μL,cDNA模板100 ng,用ddH2O补齐到20 μL。
5、根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的荧光定量RT-PCR反应条件为:95℃预变性2 min;PCR: 95℃反应15 sec,54℃反应20 sec进行40个循环。