权利要求书

1. 一种牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白抗原，其特征在于，牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白抗原由重组载体质粒pET-28H-VP6质粒转化Rosetta（DE3）菌株中表达；其中重组载体质粒pET-28H-VP6含有牦牛源轮状病毒VP6基因；

所述抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2、根据权利要求1所述的牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白抗原，其特征在于，所述的牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白通过以下方法制备得到：提取病毒核酸后进行RT-PCR，拼接扩增序列，得到序列表中SEQ ID NO.1的DNA序列；对该基因序列进行优化，5’增加酶切位点BamH I，3’增加酶切位点Xho I，His标签在N端，然后合成整个序列；将合成的全序列与pET-28H载体分别酶切后连接转化TOP10感受态，获得pET-28H-VP6质粒；将所得到的重组原核表达载体pET-28H-VP6转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞，用终浓度为0.8mM的IPTG于37℃诱导重组VP6蛋白的表达16h，将所表达的蛋白回收并纯化即得。

3、根据权利要求2所述的牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白抗原，其特征在于，PCR反应的拼接引物共2条引物：两端酶切位点分别是BamH1和Xho1，其序列分别如SEQ ID NO.4- SEQ ID NO. 5所示。

4、一种基于牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白的间接ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：0.1µg权利要求1-3中任一权利要求所述的牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白包被酶标板，37℃孵育2h；PBST洗涤后加入4%PEG6000封闭30min；PBST洗涤后加入1:1400稀释的血清，37℃孵育2h；PBST洗涤后加入1:2300稀释的酶标二抗，37℃孵育30min；PBST洗涤后加入显色液，37℃避光显色10min，加入终止液在450nm处读取OD₄₅₀。

5、根据权利要求4所述的间接ELISA检测方法，其特征在于，所述牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白的包被浓度为1µg/ml。

6、根据权利要求4所述的间接ELISA检测方法，其特征在于，血清稀释浓度为1:1400，酶标二抗稀释浓度为1:2300。

7、一种利用权利要求1所述的牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白生产的亚单位疫苗。

8、根据权利要求7所述的亚单位疫苗，其特征在于，用权利要求1所述的牦牛源轮状病毒重组VP6蛋白作为抗原，粘膜佐剂作为佐剂，以滴鼻的方式免疫BALB/c成年雌鼠，刺激母鼠体内产生了高水平的血清IgG抗体；用牛轮状病毒同时对免疫母鼠所生乳鼠和未免疫母鼠所生乳鼠灌胃攻毒，证实母源抗体传递给乳鼠，免疫母鼠为乳鼠提供保护。