1. 一种鸡肝癌细胞TREM-B2基因过表达稳转株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)人工合成5’端含有酶切位点EcoRI和3’端含有酶切位点BamHI并包含有TREM-B2 cDNA全序列信息的核苷酸序列,命名为人工合成的含鸡TREM-B2核苷酸序列,其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示,含有鸡TREM-B2基因信息的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,其对应的编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;

(2)将慢病毒过表达质粒pCD513B-1与所述人工合成的含鸡TREM-B2核苷酸序列进行EcoRI和BamHI双酶切处理,并通过T4连接酶构建pCD513B-1-TREM-B2重组质粒,然后转化Stabl3感受态细胞,挑取单克隆菌落,扩大培养后提取质粒,利用基因测序法鉴定正确的pCD513B-1-TREM-B2重组质粒,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;

(3)将所述pCD513B-1-TREM-B2重组质粒与病毒包装质粒pMD2.G和psPAX2共转染至肝癌细胞中,进行病毒包装,通过荧光细胞的数量对病毒滴度进行监控;

(4)病毒滴度以MOI=5~8感染鸡肝癌细胞时,加入终浓度为5~8 μg/ml的polybrene协助病毒;将感染病毒的所述鸡肝癌细胞进行正常传代后,加入嘌呤霉素进行筛选,嘌呤霉素的终浓度为2~6 μg/ml,每2~3天更换嘌呤霉素筛选培养基,连续培养8~10天,通过显微镜观察GFP荧光细胞比例得到稳定表达TREM-B2的细胞株,然后将细胞进行冻存处理,得到鸡肝癌细胞TREM-B2基因过表达稳转株;

所述步骤(2)中的人工合成的含鸡TREM-B2核苷酸序列具体地是插入到pCD513B-1的EcoRI和BamHI酶切位点之间;

所述的步骤(2)中将慢病毒包装质粒载体进行酶切的体系如下所示:1 μg/μl GV218 1.8-2.2 μl,10×NEB buffer 4.5-5.5 μl,100×BSA 0.4-0.6 μl,EcoRI 0.8-1.2 μl,BamHI 0.8-1.2 μl,余量为ddH2O,以上总体积为50 μl;

所述的步骤(2)中将人工合成含TREM-B2核苷酸序列酶切的体系如下所示:80-100 ng/μl鸡TREM-B2 15-20 μl,10×NEB buffer 4-6 μl,100×BSA 0.4-0.6 μl,EcoRI 0.8-1.2 μl,BamHI 0.8-1.2 μl,余量为ddH2O,以上总体积为50 μl;

所述的步骤(2)中连接pCD513B-1酶切产物和人工合成含TREM-B2核苷酸序列酶切产物的连接体系如下:pCD513B-1 1.2-1.8 μl,人工合成的含鸡TREM-B2核苷酸序列 2.0-2.8 μl,10×Thermo T4 Buffer 1.5-2.5 μl,Thermo T4 Ligase 0.4-0.6 μl,余量为ddH2O,以上总体积为20 μl。

2. 一种鸡TREM-B2的pCD513B-1-TREM-B2表达载体,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。