一种复方凝胶制剂及其制备方法、给药方式、应用
技术领域
[0001] 本发明涉及凝胶制剂,特别是涉及一种复方凝胶制剂,还涉及所述复方凝胶制剂的制备方法、给药方式以及应用。
背景技术
[0002] 勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是最常见的一种男性功能障碍疾病,其主要表现为无法达到和维持勃起以达到令人满意的性交,病程持续3个月以上。ED一般分为器质性、手术性、外伤性、精神性和阴茎自身病变,常规的治疗方法为口服药物治疗,但该治疗方法对药物的依赖性强,不能达到根治的目的。
发明内容
[0003] 基于此,有必要针对当下勃起功能障碍口服药物治疗为主,对药物的依赖性强,不能达到根治目的的问题,提供一种复方凝胶制剂及其制备方法、给药方式、应用。
[0004] 一种复方凝胶制剂的制备方法,包括以下步骤:
S1选取人脐带间充质干细胞,提供人参皂苷Rb、盐酸育亨宾、药用高分子稳定剂、保湿剂和二甲基亚砜;
S2对所述人脐带间充质干细胞进行饥饿培养-富集浓缩,得到脐带间充质干细胞外泌体浓缩液;
所述饥饿培养的方法,其具体操作如下:
S21将所述人脐带间充质干细胞接种于培养基中;
S22接种培养2~4d后,吸弃全部培养上清液,并用医用复方电解质注射液清洗2~4次,后加入复方电解质溶液,置于二氧化碳培养箱中进行饥饿培养;
S23饥饿培养18~30h后,回收全部培养上清液并用滤膜过滤,经离心后回收离心上清液;
S24继续对所述离心上清液进行离心处理,后吸弃上清液中70%~90%体积的液体,沉淀物和剩余上清液混合,得到脐带间充质干细胞外泌体浓缩液;
S3于所述脐带间充质干细胞外泌体浓缩液中依次加入人参皂苷Rb、盐酸育亨宾、药用高分子稳定剂、保湿剂和二甲基亚砜,混合得到复方凝胶制剂。
[0005] 上述制备方法,通过对脐带间充质干细胞进行饥饿培养,促进其生物活性物质的分泌,并以外泌体的形式回收脐带间充质干细胞分泌的生物活性物质,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物的同时,显著提高了回收效率,且回收方式更为简便,此外,通过超速离心来浓缩外泌体,提高外泌体的浓度。
[0006] 在其中一个实施例中,所述人脐带间充质干细胞的选取标准为:从P2~P8代的人源脐带间充质干细胞中,选取生长状态良好和微生物检测为阴性的干细胞。
[0007] 在其中一个实施例中,所述药用高分子稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟乙基淀粉中的任意一种;所述保湿剂为丙二醇和甘油。
[0008] 在其中一个实施例中,所述接种密度为3~5*104/cm2;所述培养基中包含体积比浓度为5~15%的胎牛血清。
[0009] 在其中一个实施例中,所述复方电解质溶液中,每1000ml包含氯化钠5.26g、葡萄糖酸钠5.02g、醋酸钠3.68g、氯化钾0.37g、氯化镁0.30g。
[0010] 在其中一个实施例中,所述滤膜的孔径为0.22um;经所述滤膜过滤的上清液在3000~5000g的离心力条件下离心10~20min。
[0011] 在其中一个实施例中,所述脐带间充质干细胞外泌体浓缩液具有生物活性。
[0012] 一种复方凝胶制剂,其采用所述的一种复方凝胶制剂的制备方法制备得到,每100ml所述复方凝胶制剂的组分如下:脐带间充质干细胞外泌体浓缩液50ml、人参皂苷Rb15g、盐酸育亨宾5ml、药用高分子稳定剂10g、保湿剂10ml、二甲基亚砜10ml。
[0013] 上述复方凝胶制剂,其含有浓缩5~9倍的脐带间充质干细胞经饥饿培养获得的脐带间充质干细胞外泌体浓缩液,可促进血管生成,调节局部组织微环境,改善局部供血,从而达到改善阴茎供血、治疗勃起功能障碍的效果,此外,配合盐酸育亨宾、人参皂苷Rb1制成复方剂,增加了疗效,协同加入保湿剂和吸收促进剂(二甲基亚砜),可最大限度增加外泌体的稳定性和活性,并提高其透皮吸收能力,治疗效果大大提高。
[0014] 一种复方凝胶制剂的给药方式,所述给药方式的具体操作如下:直接将复方凝胶制剂涂抹于阴茎皮肤及龟头处,经皮肤直接吸收进行给药;其中,所述复方凝胶制剂采用所述的一种复方凝胶制剂的制备方法制备得到。
[0015] 一种复方凝胶制剂在男性勃起功能障碍治疗中的应用。
[0016] 与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明的制备方法,通过对脐带间充质干细胞进行饥饿培养,促进其生物活性物质的分泌,并以外泌体的形式回收脐带间充质干细胞分泌的生物活性物质,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物的同时,显著提高了回收效率,且回收方式更为简便,此外,通过超速离心来浓缩外泌体,提高外泌体的浓度。
[0017] 本发明的复方凝胶制剂,其含有浓缩5~9倍的脐带间充质干细胞经饥饿培养获得的脐带间充质干细胞外泌体浓缩液,可促进血管生成,调节局部组织微环境,改善局部供血,从而达到改善阴茎供血、治疗勃起功能障碍的效果,此外,配合盐酸育亨宾、人参皂苷Rb1制成复方剂,增加了疗效,协同加入保湿剂和吸收促进剂(二甲基亚砜),可最大限度增加外泌体的稳定性和活性,并提高其透皮吸收能力,治疗效果大大提高。
附图说明
[0018] 图1所示为本发明实验例1治疗前后的性生活时间对比图。
[0019] 图2所示为本发明实验例2治疗前后的性生活时间对比图。
[0020] 图3所示为本发明实验例3治疗前后的性生活时间对比图。
具体实施方式
[0021] 下面结合附图对本发明进行详细的描述。
[0022] 实施例1
本实施例提供了一种复方凝胶制剂的制备方法,其包括以下步骤:
S1选取人脐带间充质干细胞,提供人参皂苷Rb、盐酸育亨宾、药用高分子稳定剂(透明质酸钠)、保湿剂(丙二醇和甘油)和二甲基亚砜(透皮吸收促进剂)。
[0023] 所述人脐带间充质干细胞的选取标准为:从P2~P8代的人源脐带间充质干细胞中,选取生长状态良好和微生物检测为阴性的干细胞。盐酸育亨宾是从非洲植物育亨宾的干燥树皮的提取物,其为成都德思特生物技术有限公司生产。人参皂苷Rb1为四川省维克奇生物科技有限公司生产。
[0024] S2对所述人脐带间充质干细胞进行饥饿培养-富集浓缩,得到脐带间充质干细胞外泌体浓缩液。
[0025] 所述脐带间充质干细胞外泌体浓缩液具有生物活性。
[0026] 所述饥饿培养的方法,其具体操作如下:
S21将所述人脐带间充质干细胞接种于培养基中。
[0027] 所述接种密度为3~5*104/cm2。培养基可置于细胞培养瓶或细胞培养皿中,所述培养基中包含体积比浓度为5~15%的胎牛血清。
[0028] S22接种培养2~4d后,吸弃全部培养上清液,并用医用复方电解质注射液清洗2~4次,后加入复方电解质溶液,置于二氧化碳培养箱中进行饥饿培养。
[0029] 复方电解质溶液为四川科伦药业股份有限公司生产,所述复方电解质溶液中,每1000ml包含氯化钠5.26g、葡萄糖酸钠5.02g、醋酸钠3.68g、氯化钾0.37g、氯化镁0.30g。接种培养2~4d后,细胞融合率达到80%~95%,细胞生长状态良好,吸弃全部培养上清液,用复方电解质注射液清洗细胞2~4次,然后加入复方电解质溶液,使溶液高度达到2~3mm,放入二氧化碳培养箱中进行饥饿培养。
[0030] S23饥饿培养18~30h后,回收全部培养上清液并用滤膜过滤,经离心后回收离心上清液。
[0031] 所述滤膜的孔径为0.22um,经滤膜过滤的上清液在3000~5000g的离心力条件下离心10~20min。
[0032] S24继续对所述离心上清液进行离心处理,后吸弃上清液中70%~90%体积的液体,沉淀物和剩余上清液混合,得到脐带间充质干细胞外泌体浓缩液。
[0033] 回收的离心上清液装入离心管中,在200000~500000g的离心力条件下离心30~60min,离心结束后轻轻取出离心管,使用移液管吸弃上清液中70%~90%体积的液体,将剩余10%~30%体积的液体和离心管底部的沉淀物均匀混合,作为制备勃起功能障碍治疗制剂的原料,即脐带间充质干细胞外泌体浓缩液。
[0034] S3于所述脐带间充质干细胞外泌体浓缩液中依次加入人参皂苷Rb、盐酸育亨宾、药用高分子稳定剂(透明质酸钠)、保湿剂(丙二醇和甘油)和二甲基亚砜,混合得到复方凝胶制剂。
[0035] 本实施例的制备方法,通过饥饿培养脐带间充质干细胞并进行富集浓缩的方法,获得高浓度的具有生物活性的脐带间充质干细胞外泌体,通过对脐带间充质干细胞进行饥饿培养,促进其生物活性物质的分泌,并以外泌体的形式回收脐带间充质干细胞分泌的生物活性物质,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物的同时,显著提高了回收效率,且回收方式更为简便,此外,通过超速离心来浓缩外泌体,提高外泌体的浓度。本实施例的制备方法,加入盐酸育亨宾和人参皂苷Rb1,制备成通过外部涂抹来治疗勃起功能障碍的外用型脐带间充质干细胞外泌体浓缩复方凝胶制剂,疗效显著。
[0036] 本实施例的制备方法,
实施例2
本实施例提供了一种复方凝胶制剂,其采用如实施例1的一种复方凝胶制剂的制备方法制备得到。每100ml所述复方凝胶制剂的组分如下:脐带间充质干细胞外泌体浓缩液50ml、人参皂苷Rb15g、盐酸育亨宾5ml、药用高分子稳定剂(透明质酸钠)10g、保湿剂(丙二醇和甘油)10ml、二甲基亚砜10ml。
[0037] 本实施例,脐带间充质干细胞外泌体浓缩液的外泌体成分具有生物活性,外泌体内的细胞因子(如VEGF和成纤维细胞生长因子)的释放,可促进血管生成,可调节局部组织微环境,改善局部供血,从而达到改善阴茎供血、治疗勃起功能障碍的效果。配合掺入盐酸育亨宾,其通过扩张人茎动脉来增加阴茎海绵体窦血流量,使阴茎充血勃起,并且还能产生心理上的兴奋作用,增加性欲,此外,还可使阴茎海绵体平滑肌达到最大松弛效应。本实施例,掺入人参皂苷Rb1来加速性成熟过程,对于性机能及性器官发育均有良好促进作用,对应激所致性行为低下亦有较好改善作用,人参皂苷Rb1通过提高雄激素水平、激活NO/cGMP通路而起到改善性功能作用。
[0038] 人参皂苷Rb1可加速性成熟过程,对于性机能及性器官发育均有良好促进作用,对应激所致性行为低下亦有较好改善作用,而人参皂苷Rb1通过提高雄激素水平、激活NO/cGMP通路而起到改善性功能作用。本发明采用饥饿脐带间充质干细胞的方法,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物,通过超速离心的方法浓缩以获得高浓度的人脐带间充质干细胞外泌体。
[0039] 本实施例还提供了上述复方凝胶制剂的给药方式,通过直接将复方凝胶制剂涂抹于阴茎皮肤及龟头处,经皮肤直接吸收进行给药。
[0040] 本实施例的复方凝胶制剂,其含有浓缩5~9倍的脐带间充质干细胞经饥饿培养获得的脐带间充质干细胞外泌体浓缩液,可促进血管生成,调节局部组织微环境,改善局部供血,从而达到改善阴茎供血、治疗勃起功能障碍的效果,此外,配合盐酸育亨宾、人参皂苷Rb1制成复方剂,增加了疗效,协同加入保湿剂和吸收促进剂(二甲基亚砜),可最大限度增加外泌体的稳定性和活性,并提高其透皮吸收能力,治疗效果大大提高。
[0041] 下面,使用本发明的复方凝胶制剂来进行勃起功能障碍症状的治疗实验,实验过程和实验结果如下。
[0042] 实验例1
患者王某(32岁),因工生活压力大,在一年前出现性欲减退、性生活频率降低,并出现早期的勃起功能障碍症状,治疗前,4个月内性生活频率平均为1次/周,其中2次因阴茎无法正常勃起未完成性生活。5次在性交过程中阴茎在射精前未能保持勃起状态,射精失败。另外9次完成了性交过程,平均时间不足3min。按照《国际勃起功能指数》自测评分为13分,属于轻度勃起功能障碍。
[0043] 患者使用复方凝胶制剂治疗(治疗周期为四周),每天在早晨、中午及晚上入睡前清洗阴茎后,取复方凝胶制剂涂抹阴茎的整个龟头,每次涂抹1~2ml,保证复方凝胶制剂全部被吸收。治疗过程中,患者保持1次/周的性生活频率,期间勃起情况不做统计。治疗四周后停用复方凝胶制剂,一个月内患者共进行5次性生活,全部成功完成射精,平均性交时间达到6min。请参阅图1,图1所示为王某治疗前后性生活时间对比图,对比可知,治疗效果明显,差异显著(p<0.01),这证明了本发明的复方凝胶制剂,在勃起功能障碍的治疗中,具有显著的疗效。
[0044] 实验例2
患者李某(36岁),患糖尿病2年以上,性生活频率降低,出现明显勃起功能障碍症状。治疗前,3个月内性生活频率平均为1次/周。统计3个月的性生活质量,其中3次因阴茎无法正常勃起未完成性生活。5次在性交过程中阴茎在射精前未能保持勃起状态,射精失败。另外4次完成了性交过程,平均时间不足3min。按照《国际勃起功能指数》自测评分为9 分,属于中度勃起功能障碍。
[0045] 患者使用复方凝胶制剂治疗(治疗周期为四周),每天在早晨、中午及晚上入睡前清洗阴茎后取复方凝胶制剂涂抹阴茎的整个龟头,每次涂抹1~2ml,保证复方凝胶制剂全部被吸收。治疗过程中,患者发生过两次性生活,期间勃起情况不做统计。治疗四周后停用复方凝胶制剂,3个月内患者共进行9次性生活,全部成功完成射精,平均性交时间达到5.4min。请参阅图2,图2所示为李某治疗前后性生活时间对比图,对比可知,治疗效果明显,差异显著(p<0.01)。这证明了本发明的复方凝胶制剂,在勃起功能障碍的治疗中,具有显著的疗效。
[0046] 实验例3
患者朱某(38岁),销售经理,工作压力大。近1年来,性生活频率降低,治疗前7个月内性生活频率平均为1次/周,出现明显勃起功能障碍症状。统计近3个月的性生活质量,其中2次因阴茎无法正常勃起未完成性生活。4次在性交过程中阴茎在射精前未能保持勃起状态,射精失败。另外6次完成了性交过程,平均时间不足4min。按照《国际勃起功能指数》自测评分为13分,属于轻度勃起功能障碍。
[0047] 患者使用复方凝胶制剂治疗(治疗周期为四周),每天在早晨、中午及晚上入睡前清洗阴茎后取复方凝胶制剂涂抹阴茎的整个龟头,每次涂抹1~2ml,保证复方凝胶制剂全部被吸收。治疗过程中,患者发生过4次性生活,期间勃起情况不做统计。治疗四周后停用复方凝胶制剂,3个月内患者共进行15次性生活,全部成功完成射精,平均性交时间达到7.5min。请参阅图3,图3所示为朱某治疗前后性生活时间对比图,对比可知,治疗效果明显,差异显著(p<0.01),这证明了本发明的复方凝胶制剂,在勃起功能障碍的治疗中,具有显著的疗效。