尊敬的审查员:

本意见陈述是针对国家知识产权局于2022年01月25日发出的关于《一种检测NebovirusSYBR Green荧光定量RT-PCR引物及应用》的第一次审查意见通知书,对于审查员在第一次审查意见通知书中的论述,申请人进行了认真的研读,并作出以下修改和意见陈述。

一、修改说明

将原权利要求2~6的主题改成“一种非诊断目的地检测Nebovirus的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法”;

将原权利要求7改成份“权利要求1所述的检测Nebovirus的SYBR Green荧光定量RT-PCR引物在制备Nebovirus快速诊断试剂盒中的应用”。

以上修改均未超出原说明书和原权利要求书所记载的范围,符合专利法第三十三条的规定,且上述修改也是针对审查意见通知书所指出的缺陷进行修改,符合专利法实施细则第五十一条三款规定。

具体的修改内容详见权利要求书替换页。

二、意见陈述

1)权利要求1具有创造性

权利要求1请求保护一种检测Nebovirus的SYBR Green荧光定量RT-PCR引物。对比文件1公开的是SYBR-Green实时RT-PCR快速检测、定量和诊断未分类牛肠道杯状病毒的研究。

权利要求1相较于对比文件1具有以下区别特征:要检测的病原体不同,引物序列不同。

针对上述区别技术特征,本申请实际要解决的技术问题为:提供一种检测Nebovirus的SYBR Green荧光定量RT-PCR引物。

为解决上述技术问题,本申请根据国内毒株公布的所有Nebovirus序列,设计了一种灵敏性高、稳定性好、检出率高的引物,将该引物用于NebovirusSYBR Green荧光定量RT-PCR检测,整个扩增只需要1 h即可完成,检测的灵敏度到29 copies/µL

对比文件2公开的是在中国首次从牛身上检测到Nebovirus和Norovirus的情况,属于定性检测的范围,并且其采用的下游引物序列与本申请不同

进一步地,审查意见中认为:本领域技术人员基于对比文件1上述公开的可针对Ncbovirus的RDRP基因设计检测引物以达到检测目的的教导,容易想到在现有技术中寻找其它靶点以达到丰富检测引物种类的目的。在此基础上,对比文件2教导了另一种可用于特异性扩增Nebovirus的引物种类及其对应的保守区域。基于对比文件2的上述教导,本领域技术人员在面对如何丰富检测Nebovirus的引物种类的问题时,有动机参考对比文件2所教导的引物序列及其对应的保守区域,使用本领域常用的引物设计软件设计并得到相应的检测引物。

对此,申请人完全难以认同,具体分析如下。

其一,对比文件1针对的是牛肠道杯状病毒检测,所采用的引物序列与本申请完全不同。牛肠道杯状病毒和诺沃克病毒(Nebovirus)属于两种完全不同的病毒,牛肠道杯状病毒可以采用SYBR Green荧光定量方式检测出,并不意味着Nebovirus病毒也可以,这两者之间并不具有关联性。而且对比文件1只给出了可以进行牛肠道杯状病毒SYBR Green荧光定量检测的引物序列,其并未启示和教导如何对可该引物序列进行长度、位置、结构等信息的调整以形成可以适用于Nebovirus的检测引物。

进一步地,对比文件2的目的是为了证实了中国存在Nebovirus和NoV sGIII。并且还证实了中国存在两株Nebovirus与Bo/DijonA216/06/FR聚集在一起形成了一种新的“DijonA216样”Nebovirus基因型。其属于一种定性检测,即要检测出Nebovirus和Norovirus,以及研究两者地关联性。而本申请则是为了对Nebovirus进行快速定量检测。尽管对比文件2采用的上游引物序列与本申请的相同,但下游引物序列则完全不相同,这也验证了本申请与对比文件2是基于不同的检测目的。此外,对比文件2和本申请属于两个不同的研究阶段,显然对比文件2属于前先研究阶段,其确认了中国存在Nebovirus,而本申请则属于后一个研究阶段,通过在中国存在的这些Nebovirus而设计引物开展定量研究。显然,该研究结果是无法通过在确认是否存在Nebovirus的过程而显而易见地获得的,其效果更是无法预期。

其二,本申请的引物序列应用于Nebovirus的SYBR Green荧光定量PCR检测整个扩增只需要1 h即可完成,检测的灵敏度到29 copies/µL,并且检测准确率高(详见表2中常规PCR、国外SYBR Green荧光定量RT-PCR、本申请的SYBR Green荧光定量RT-PCR结果比对)、重复性好(详见表1中重复性考察数据)。

综上所述,本申请权利要求1具有突出的实质性特点和显著的进步, 具备专利法第22 条第3 款规定的创造性。

2)修改后的权利要求2~7具有创造性

修改后的权利要求2保护的是一种非诊断目的地检测Nebovirus的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,是基于权利要求1的检测引物实现,在权利要求1具备创造性的前提下,权利要求2也具备创造性。

权利要求3~6为权利要求1的从属权利要求,在其引用的权利要求2具备创造性的前提下,修改后的权利要求3~6也具备创造性。

修改后的权利要求7保护的是权利要求1所述的检测Nebovirus的SYBR Green荧光定量RT-PCR引物在制备Nebovirus快速诊断试剂盒中的应用。也是基于权利要求1的检测引物实现,在权利要求1具备创造性的前提下,权利要求7也具备创造性。

申请人认为,以上陈述克服了审查意见中所指出的所有缺陷,希望审查员以此为基础继续审查该发明申请并予以授权。如果审查员认为本申请仍有不符合专利法规定之处,恳请再给予修改/陈述意见的机会。

最后对审查员认真细致的工作再次表示感谢。