1. 一种检测NebovirusSYBR Green荧光定量RT-PCR引物,其特征在于,包括上游引物NeV F、下游引物NeV R,其中,上游引物NeV F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物NeV R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2、一种非诊断目的地检测NebovirusSYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,其特征在于,包括以下步骤:

提取待检测样品的RNA,以待检测样品的RNA为模板,反转录得到cDNA,用权利要求 1中所述的引物和SYBR GreencDNA进行荧光定量RT-PCR扩增;通过实时荧光定量PCR仪进行结果的读取,判断S型扩增曲线和荧光强度值,在扩增曲线正常的情况下,若荧光强度值超过阈值时,则记为阳性,则该待检测样品含有Nebovirus病毒,若荧光强度值低于阈值时,则记为阴性,则该待检测样品不含有Nebovirus病毒。

3、根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述反转录的步骤为:将RNA模板4 µL15×Prime Script Buffer 4 µL2Prime ScriptRT Enzyme Mix 1 μL4Random 6 mers 2 µL5RNase Free dH2O 9 μL混匀,放入PCR仪上进行反转录。

4、根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述反转录反应所需试剂为宝生物工程(大连)有限公司的PrimeScriptTMRT试剂。

5、根据权利要求2所述的方法,其特征在于,荧光定量PCR反应检测体系为:TB Green Premix Ex Taq  10 μL,上游引物NeV F、下游引物NeV R1.0 μLcDNA模板100 ng,用ddH2O补齐到20 μL

6、根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的荧光定量RT-PCR反应条件为:95℃预变性2 minPCR: 95℃反应15 sec51℃反应20 sec进行40个循环。

7、权利要求1所述的检测NebovirusSYBR Green荧光定量RT-PCR引物在制备Nebovirus快速诊断试剂盒中的应用。