权利要求书

1. 一种玉米转录因子ZmEREB92基因，其特征在于：所述玉米转录因子ZmEREB92基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2. 一种玉米转录因子ZmEREB92蛋白，其特征在于：所述玉米转录因子ZmEREB92蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该蛋白具有DNA结合结构域AP2，且AP2位于氨基酸N端34到97区域内。

3. 含有权利要求1所述的玉米转录因子ZmEREB92基因的重组表达载体。

4. 含有权利要求3所述的重组表达载体的重组菌株。

5. 权利要求1所述的玉米转录因子ZmEREB92基因或者权利要求4所述的重组菌株在调控玉米种子萌发上的应用。

6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述玉米转录因子ZmEREB92基因通过乙烯途径调控玉米种子萌发。

7. 一种CRISPR/Cas9 介导的 ZmEREB92 敲除突变体玉米植株的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）构建含有ZmEREB92基因的表达载体；

（2）将表达载体转化DH5α感受态细胞后培养获得单克隆菌株；

（3）将单克隆菌株转入农杆菌，然后以玉米幼胚为材料，通过农杆菌介导的玉米幼胚进行遗传转化，即得。

8. 根据权利要求7所述的一种CRISPR/Cas9 介导的 ZmEREB92 敲除突变体玉米植株的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）具体包括：

（1-1）在 ZmEREB92基因的N末端和 ERF 结构域内选择了两个引guide-RNA 靶向位点：EREB92-Target1和EREB92-Target2，以在该区域产生 144bp 的缺失；然后以过渡载体pSG-MU6载体为模板进行PCR扩增，引物为P200006-F和P200006-R，获得PCR产物后进行原液回收；所述EREB92-Target1的序列结构如SEQ ID NO.3所示，所述EREB92-Target2的序列结构如SEQ ID NO.4所示，所述P200006-F的序列结构如SEQ ID NO.5所示，所述P200006-R的序列结构如SEQ ID NO.6所示；

（1-2）将回收产物和转基因载体pCXB053分别使用bsal酶进行酶切，回收二者的酶切产物，并通过T4连接酶连接，获得含有ZmEREB92基因的表达载体。

9. 根据权利要求7所述的一种CRISPR/Cas9 介导的 ZmEREB92 敲除突变体玉米植株的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）具体包括：

（2-1）将单克隆菌株通过电击法转入农杆菌中，得到农杆菌悬浮液；

（2-2）以玉米幼胚为材料，将剥取的玉米胚加入至农杆菌悬浮液中处理一段时间；之后吸去农杆菌悬浮液，加入农杆菌悬浮液放置一段时间，再加入共培养基于23℃黑暗共培养3天；

（2-3）共培养后，将幼胚转移到休息培养基中，于28℃黑暗培养6天，放至含双丙氨膦的筛选培养基上，开始筛选培养两周，获得抗性愈伤组织；

（2-4）将抗性愈伤组织转移至分化培养基中，于25℃、5000lx、光照条件下培养3周，获得分化小苗；

（2-5）将分化小苗转移至生根培养基上，于25℃、5000lx、光照条件下培养直到生根；再将小苗转入穴盘生长，随后移植到大田生长，收获后得到T1代ereb92突变体玉米；

（2-6）将T1代ereb92突变体玉米遗传到T3代，即得。