1.
一种制备牛纽布病毒重组VP1基因蛋白的方法,其特征在于:包括:
(1)提取牛纽布病毒核酸后进行RT-PCR,拼接扩增序列,然后进行优化,得到SEQ ID NO:3所示的核酸序列,在其5’增加酶切位点Nde I,3’增加酶切位点Xho I,N端添加His标签,Nde I和Xho I位点序列为CATATG和CTCGAG,合成整个序列;
(2)将步骤(1)得到的核酸序列与pET-28H载体分别酶切后连接转化TOP10感受态,获得重组原核表达载体;
(3)将所得到的重组原核表达载体转化大肠杆菌表达感受态细胞,用IPTG于20℃过夜诱导重组VP1基因蛋白表达,将所表达的蛋白回收并纯化即得。
2、一种牛纽布病毒抗体检测试剂盒,其特征在于:包括权利要求1所述方法制备得到的牛纽布病毒重组VP1基因蛋白。
3、一种非诊断目的牛纽布病毒抗体的间接ELISA检测方法,奇特在于:包括以下步骤:
(1)包被抗原:将权利要求1所述方法制备得到的重组VP1蛋白作为抗原,包被于酶标板中,4℃过夜;
(2)洗涤酶标板:次日弃去包被液,用PBST洗涤多次;
(3)封闭:加入封闭液于37℃封闭30min~2h;
(4)洗涤酶标板:弃去封闭液,用PBST洗涤多次;
(5)孵育一抗:将阴性和阳性血清分别稀释后加入酶标板中,37℃孵育30min~2h;
(6)洗涤酶标板:弃去板中的液体,用PBST洗涤多次;
(7)酶标二抗:将HRP标记的兔抗牛IgG稀释后于37℃酶标30min~2h;
(8)洗涤酶标板:弃去板中的液体,用PBST洗涤多次;
(9)显色:加入TMB显色液,37℃避光显色10~30 min;
(10)终止:加入2mol/L H2SO4终止反应;
(11)读数:在酶标仪上读取D450nm值;试验设标准阳性、标准阴性血清对照。