1. 一种微环DNA的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)以MN511A-1质粒为基础质粒,设计引物,进行PCR扩增,在CMV-EGFP-polyA阅读框两侧分别引入lox66lox71位点,得到扩增产物一,其中所述引物序列分别如SEQ ID NO:1~4所示;

其中,引入lox66位点的上游引物和下游引物序列分别如SEQ ID NO:1SEQ ID NO:2所示,引入lox71位点的上游引物和下游引物序列分别如SEQ ID NO:3SEQ ID NO:4所示,

2)用SacIIStuI同时双酶切所述扩增产物一,连接后,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,得到pYL19完整质粒;

3)将pYL19完整质粒进行PCR扩增,并引入XmaIPacI酶切位点,得到扩增产物二;其中进行PCR扩增的上游引物和下游引物序列分别如SEQ ID NO:5SEQ ID NO:6所示;

4)将PGK-cre-polyA质粒进行PCR扩增,并引入XmaIPacI酶切位点,得到扩增产物三,所述扩增产物三为含有PGK启动子、Cre重组酶及PolyA尾的阅读框;其中进行PCR扩增的上游引物和下游引物序列分别如SEQ ID NO:7SEQ ID NO:8所示;

5)用XmaIPacI同时双酶切所述扩增产物二和所述扩增产物三,连接后,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,得到pYL46完整质粒;

6)对所述pYL46完整质粒提取重组质粒,然后将提取的重组质粒瞬时转染至培养状态良好的人胚肾 HEK-293 T细胞,检测Cre重组酶表达及微环DNA形成;所形成的微环DNA含有编码EGFP绿色荧光蛋白报告基因;

所述检测Cre重组酶表达的方法具体为: pYL46重组质粒转染HEK-293 T细胞24h后,收集细胞蛋白进行Western-Blot检测,并对该细胞进行免疫荧光,检测Cre重组酶表达;

所述检测微环DNA形成的具体方法为:pYL46重组质粒转染HEK-293 T细胞24h后,使用细胞核提取试剂盒提取细胞核,再以酚氯仿法提取细胞核中总DNA,使用PCR的方法检测mcDNA的形成,所采用的上游引物和下游引物序列分别如SEQ ID NO:9SEQ ID NO:10所示。

2、一种微环DNA,其特征在于,所述微环DNA通过权利要求1所述方法制备。

3、权利要求2所述微环DNA或权利要求1所述微环DNA的制备方法获得的微环DNA在制备抗鸡新城疫病毒细菌制剂中的应用,该应用方法包括以下步骤:

1)用KpnINotI同时双酶切pYL46完整质粒;

2)目的片段基因VIINDVHN基因经NA-HN-Kpnl-F/NA-HN-Notl-R引物进行PCR扩增后,也进行KpnINotI同时双酶切;

3)将pYL46完整质粒的酶切产物与HN基因扩增后的酶切产物以T4连接酶连接,转化Top10后得到pYL47质粒;

4)以pYL47质粒转化沙门菌SG9R后免疫3日龄雏鸡。