权利要求书

1. 一种pH敏感渗透树脂智能材料，其特征在于，所述pH敏感渗透树脂智能材料按照质量百分比计，由22 .2%~24%的Bis‑GMA、69 .375%~75%的TEGDMA、0 .4625%~75%的CQ、0 .4625%~0 .5%的4E以及0%~5%的DMAEM组成；

　　一种应用所述pH敏感渗透树脂智能材料的制备方法，其特征在于：

　　暗室中，将相应质量的DMAEM和渗透树脂加入样本瓶中，避光条件下在摇床上溶解混匀24h。

2 .一种应用如权利要求1所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征在于包括以下步骤：

　　步骤一，pH敏感渗透树脂的生物安全性检测；

　　步骤二，pH敏感渗透树脂的机械性能检测；

　　步骤三，pH敏感渗透树脂的抗菌性检测；

　　步骤四，pH敏感渗透树脂的抑制牙体硬组织脱矿检测。

3 .如权利要求2所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征在于：

　　使用96孔板，每个孔加入5μL添加不同质量分数DMAEM的渗透树脂，光固化40s制成材料薄片，双蒸水浸泡24h后，进行环氧乙烷低温消毒；同一组的样本n=9浸泡在200μL细胞培养基中，在37℃环境中浸泡24h，从而获得材料浸提液，1mL浸提液用新鲜培养基分别稀释至280mL；

　　用含有浸提液的培养基重悬人口腔角质细胞HOK，阳性对照组使用无浸提液培养基，将细胞液的浓度调整至40000 cells/mL，取100μL接种于96孔板，在条件为5% CO2，37℃恒温培养箱中培养24h；更换新鲜的含有浸提液的培养基再培养48h；加入10μL CCK‑8溶液，在恒温培养箱中孵育1h后，使用酶标仪测量波长为450nm的光密度OD值。

4 .如权利要求2所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征在于：

将渗透树脂制备成2mm*2mm*25mm的长方体，用计算机控制的万能试验机对长方体渗透树脂样本进行三点弯曲断裂试验，测试跨度为10mm，速度为1mm/min；其中，所述万能试验机为5500R；MTS，Cary，NC，USA。

5 .如权利要求2所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征包括：

　　唾液的收集：唾液来自处于25~28岁年龄阶段的志愿者，且三个月内没有服用抗生素，无牙周炎或活动性龋损；志愿者在收集唾液前的12h内不刷牙，禁食禁饮2h；收集刺激性唾液，并将唾液样本等比例混合，加入等体积的50%无菌甘油后混匀并分装于2mL冻存管中，保存于液氮中待用；

　　生物膜的培养：使用96孔板，每个孔加入5μL添加不同质量分数DMAEM的渗透树脂，光固化40s制成材料薄片，双蒸水浸泡24h后，进行环氧乙烷低温消毒；在96孔板中1：50接种唾液微生物膜，培养基为Mcbain培养基，于5% CO2细胞培养箱、37℃兼性厌氧条件下培养24h后行MTT、结晶紫染色、产乳酸及CFU检测；

　　MTT：生物膜在培养箱中培养24h后，在无菌磷酸盐缓冲液中轻柔漂洗3次，去除表面浮游细菌；每孔贴壁缓慢加入300uL浓度为0 .5mg/mL的新鲜MTT溶液，铝箔包裹避光，再次放入厌氧培养箱，在37℃、兼性厌氧条件下培养孵育1h，移除MTT溶液，每孔缓慢加入300uL二甲基亚砜DMSO溶液，放置在水平摇床20min，待生物膜完全脱色，将孔板中溶液吹打均匀，每孔取100μL溶液至96孔板中，每孔3个平行样，使用酶标仪测量波长为540nm处的OD值；

　　结晶紫：生物膜在培养箱中培养24h后，在无菌磷酸盐缓冲液中轻柔漂洗3次，去除表面浮游细菌；每孔贴壁缓慢加入300uL甲醇，作用15min，达到固定三菌种生物膜的目的；吸干甲醇溶液在无菌磷酸盐缓冲液中轻柔漂洗3次，再次除去溶液后，贴壁加入300uL 0 .1%结晶紫溶液，染色5min；再次在磷酸盐缓冲液中轻柔漂洗直至漂洗液无色，并贴壁加入300uL95%乙醇溶液，避光放置在摇床上30min，直至观察到生物膜已完全脱色；每孔3个平行样，分别吸出100μL脱色液至96孔板中，用酶标仪在波长为595nm的OD值；

　　产乳酸：生物膜在培养箱中培养24h后，在无菌磷酸盐缓冲液中轻柔漂洗3次，去除表面浮游细菌；每孔贴壁加入1 .5mL含有0 .2%蔗糖的缓冲蛋白胨水，再放入温度为37℃兼性厌氧环境中3h使成熟的生物膜继续产酸；3h后取出并将样本移除并使用乳酸测定盒测量缓冲蛋白胨水中乳酸的浓度。

6 .如权利要求5所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征在于，所述兼性厌氧环境的气体比例为80% N₂，10% H₂，10% CO₂。

7 .如权利要求2所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征包括：

　　牛牙压块样本制备：新鲜拔除的年轻牛牙，清洁后浸泡保存于0 .1%麝香草酚溶液中；低速切割机切割成冠根两部分，丢弃牙根部分，保留牙冠部分待用；体式显微镜下观察样本，剔除有缺陷及裂纹的牛牙样本；将样本清洁、干燥后，釉质面朝下放置在硅胶孔中，用树脂包埋待树脂彻底固化后，使用抛光机打磨；依次使用800#、1200#、2500#、3000#、5000#氧化铝砂纸在低速精密抛光机打磨，抛光掉表面150μm釉质层，暴露至少5×5mm的开窗面，使用抗酸指甲油涂布在开窗面之外的区域；

　　样本脱矿：脱矿溶液由50mM乙酸盐溶液组成，其中含有1 .28mM硝酸钙，0 .74mM磷酸二氢钾和0 .03ppm氟化钠；调节pH值为5 .0，样本在37℃、未搅拌环境中浸泡16h；使用的溶液的总容积用2mL/mm²釉质面积计算；

　　渗透树脂处理：清洁脱矿后的牛牙样本，去除表面污染物质；干燥牛牙样本后，将15%盐酸涂布于脱矿部位，作用2min；吹净并用水清洗30s，接着用无水无油的气枪吹干；在脱矿区域使用无水乙醇对病变区域进行彻底脱水干燥，作用30s后用无水无油的气枪吹干；脱矿区域涂布1μL渗透树脂，作用3min；棉签擦拭去除多余材料后光固化60s；重复涂布渗透树脂，作用1min后再次去除多余材料并进行60s的光固化处理；

生物膜处理：每组6个样本，将样本放入24孔板中，并以50：1的比例加入Mcbain培养基和唾液‑甘油混合物，每孔2mL，培养于温度为37℃的厌氧培养箱中，气体比例为80% N₂，10%H₂，10% CO₂，对样本进行脱矿处理一周，然后进行表面显微硬度分析。

8 .如权利要求7所述pH敏感渗透树脂智能材料的性能检测方法，其特征在于，所述生物膜处理后，需进行：

　　显微硬度检测：显微硬度仪使用参数为强度25g，作用时间为5s；未处理的牙釉质块，经过脱矿处理的牙釉质块硬度均作为对照组进行检测。